Применение коллагена в биотехнологии

Продажа натуральных белков:

НАТУРАЛЬНЫЙ КЕРАТИН

КОЛЛАГЕН КОСМЕТИЧЕСКИЙ

НАТИВНЫЙ ЭЛАСТИН (с десмозинами)

Сапожникова А.И., Каспарьянц С.А.

Известно, что коллаген, будучи гликопротеидом внеклеточного матрикса, является еще и компонентом надмембранного слоя клеточной поверхности. Он активно участвует в процессах адгезии клеток и распластывании их на подложке (Alitalo K. et. al., 1980; Любимов А.В., 1980; Афиногенов В.А. и др., 1992). Это дает основание для использования коллагена в биотехнологии в качестве микроносителя для псевдосуспензионного культивирования субстратзависимых клеток млекопитающих при производстве вирусных вакцин, а также как сорбента для аффинной хроматографии.

Нами разработан способ получения микроносителей из недубленых коллагенсодержащих отходов кожевенного производства, которые вначале перерабатывают в нейтральную концентрированную коллагеновую массу, содержащую до 20,8-22,4 %, сухого остатка. Полученный полуфабрикат электризуют и впрыскивают под давлением через металлическое сопло в масло или маслосодержащую эмульсию. Образующуюся двухфазную смесь перемешивают с помощью низкочастотного ультразвука. В результате получают сферические гранулы частично денатурированного коллагена, несущие одноименный электрический заряд.
Образовавшиеся гранулы обезжиривают, задубливают глутаровым альдегидом, а затем на их поверхности иммобилизуют нативный коллаген. После серии дополнительных обработок и автоклавирования микроноситель пригоден для использования.
Новизна, промышленная применимость и изобретательский уровень предложенного технического решения защищены патентом № 2007451 РФ.

По внешнему виду конечный продукт, получаемый согласно разработанной нами технологии, представляет собой сферически прозрачные частицы желтовато-коричневого цвета.

Результаты опытов по определению физико-химических параметров и, соответственно, биологической активности экспериментальных серий коллагенового микроносителя, названного нами ЦИТОКОЛ.
Скорость седиментации гранул микроносителя возрастает с увеличением их размера. Что касается плотности гранул, то она одинакова для частиц любого размера. Очень важным параметром, характеризующим технологические возможности микроносителя как субстрата для прикрепления клеток, является площадь ростовой поверхности 1 мл3 гидратированных гранул, определенная расчетным путем для каждой серии микроносителя. Очевидно, что чем больше площадь ростовой поверхности, тем большую клеточную массу можно получить в процессе культивирования.

Существует обратная зависимость между размером частиц микроносителя и площадью ростовой поверхности. При выборе оптимальной фракции микроносителя необходимо учитывать то обстоятельство, что для нормальной адгезии и пролиферации клеток необходимо, чтобы размер частиц микроносителя был больше размера клетки не менее чем в 100 раз. В связи с тем, что клетки перевиваемых культур имеют слабый отрицательный заряд, и для хорошей их адгезии микроноситель должен быть заряжен положительно.

Согласно данным лабораторно-экспериментальная проверки, микроноситель пригоден для выращивания перевиваемой линии клеток Таурус-1, фибробластов кожи человека, клеток эпидермоидной карциномы человека и нормальных кератиноцитов кожи человека.

Другие статьи раздела «Коллаген в косметологии и медицине» расположены здесь…

Комментирование закрыто.

Комментирии закрыты